Com um teste ELISA, certos componentes em nossos fluidos corporais podem ser detectados. Como exatamente isso funciona e para que o método ELISA é usado é explicado neste artigo.
Com os métodos de teste ELISA, os componentes de uma reação imune podem ser detectados de forma rápida e fácil. Isso ajuda em muitas áreas, por exemplo, para diagnosticar doenças virais ou bacterianas.
O que é um teste ELISA?
O termo ELISA é a abreviatura de ” Enzyme – Linked Immunosorbent Assay ” . O significado é algo como método de detecção imunológico ligado a enzimas .
Ele é usado para detectar certas moléculas como vírus ou bactérias em nosso corpo através de anticorpos. Os anticorpos são então tornados visíveis através de uma reação de cor ligada à enzima.
O teste ELISA é de grande importância no diagnóstico médico, pois permite a detecção de diversos corpos estranhos ( anticorpos, vírus, bactérias, toxinas ).
Para que serve o ELISA?
A abreviatura significa “ensaio imunoabsorvente ligado a enzima” ou teste imunoabsorvente ligado a enzima. Grosso modo, isso significa: com a ajuda de uma enzima, pode-se tornar visível se existem partículas estranhas, como vírus, no corpo ou se o sistema imunológico iniciou uma reação de defesa.
Isso ajuda, por exemplo, em diagnósticos médicos: os laboratórios podem usar o teste ELISA para detectar vírus , bactérias , parasitas ou anticorpos contra esses invasores. Também é possível ver se um paciente já está imune a um vírus.
Esse procedimento também se tornou muito importante no início de 2020 com a disseminação do coronavírus SARS-CoV-2 . Embora outros tipos de testes para SARS-CoV-2 também sejam usados, o ELISA é particularmente útil para certas questões. Por exemplo, para examinar se alguém foi infectado com o vírus, mesmo que não apresente sintomas – os anticorpos correspondentes são encontrados no sangue .
O método ELISA não é usado apenas para detectar infecções. Ele pode ser usado para medir praticamente qualquer coisa para a qual anticorpos específicos podem ser produzidos – incluindo proteínas como hormônios , marcadores tumorais ou toxinas e drogas . A ligação de um anticorpo ao seu alvo é tão distinta que o ELISA detecta quantidades mínimas e não rotula acidentalmente um alvo incorreto.
A maioria dos testes ELISA, como outros diagnósticos médicos, deve ser realizada em laboratório. No entanto, um ELISA pode ser realizado de forma rápida e fácil em casa e fornece resultados muito precisos: o teste de gravidez .
Outra área é o controle de alimentos. O teste ELISA pode, por exemplo, examinar amostras de carne picada de que animais a carne é originária. O método ELISA também pode ser usado para testar se um alimento contém glúten.
Uma rápida olhada no sistema imunológico
O sistema imunológico é responsável por combater os invasores no corpo. Podem ser vírus, bactérias, fungos ou parasitas, por exemplo. Essas células estranhas são chamadas de antígenos .
Os antígenos são reconhecidos por anticorpos . Estas são proteínas que têm uma forma de Y característica e podem se acoplar a antígenos. Os anticorpos então enviam sinais que ativam o resto do sistema imunológico. As células infectadas morrem, ou as chamadas células scavenger eliminam os invasores.
O método ELISA utiliza os princípios da resposta do sistema imunológico a um invasor para detectar anticorpos ou antígenos.
Evidência ELISA
ELISA (ensaio imunoabsorvente ligado a enzima) é um método comum para detectar proteínas individuais. Os mecanismos do sistema imunológico são usados aqui: Se uma substância é reconhecida como estranha pelo sistema imunológico, ela forma “anticorpos” que se fixam na molécula estranha e, assim, a marcam.
Esta chamada reação anticorpo-antígeno é usada para o teste ELISA. Se uma proteína específica deve ser detectada, os anticorpos apropriados devem ser conhecidos. Eles são então produzidos usando vários processos de engenharia genética ou biológicos celulares e aplicados a um meio transportador. Se a proteína desejada (antígeno) estiver presente em uma amostra, os anticorpos se ligam a esses antígenos. Isso desencadeia uma reação controlada por enzimas que leva a um depósito de cor visível.
Os testes ELISA são agora amplamente utilizados em diagnósticos médicos. No entanto, eles também são usados em muitas outras áreas quando proteínas individuais precisam ser detectadas. Uma distinção deve ser feita entre os métodos com os quais as sequências de DNA ou DNA podem ser detectadas.
Para que exatamente o método ELISA é usado no laboratório em bioquímica e medicina?
Em princípio, qualquer substância contra a qual um anticorpo possa ser produzido pode ser detectada em lisados celulares, sangue ou amostras de alimentos. Os cientistas usam isso nas seguintes áreas:
- Detecção de vírus, bactérias e anticorpos : para detectar infecções, por exemplo, como teste de vírus para o vírus HI ou o coronavírus SARS-CoV2
- Medição da concentração de hormônios, marcadores tumorais ou toxinas: por exemplo, para detectar câncer
- Teste de gravidez : medição de uma proteína específica produzida durante a gravidez.
- Controle de alimentos : para determinar se um alimento contém alérgenos como glúten
Princípio ELISA
Agora vamos ver como funciona a detecção pelo princípio ELISA. O teste sorológico (teste de anticorpos) utiliza o funcionamento do nosso sistema imunológico. Porque se baseia na ligação de um anticorpo a um antígeno. Uma reação de cor pode então ser usada para determinar quantos antígenos ou anticorpos estão em uma amostra.
Os antígenos são componentes de partículas estranhas em nosso corpo, como vírus ou bactérias. Eles estão ligados pelos chamados anticorpos . Estas são proteínas especiais que podem reconhecer e ligar estruturas estranhas muito especificamente. Mas eles têm uma aparência característica em forma de Y. A ligação dos anticorpos ativa o sistema imunológico e fornece uma defesa contra os invasores.
Existem agora diferentes variantes de como a detecção usando uma ligação anticorpo-antígeno pode ocorrer exatamente.
ELISA indireto
Por exemplo, se agora queremos saber se um paciente tem anticorpos contra um vírus, procedemos da seguinte forma:
- O antígeno (parte do vírus) é ligado ao fundo de uma placa de microtitulação (placa com poços).
- A amostra do paciente ( sangue, urina ) é colocada nos poços. Se a amostra contiver anticorpos, eles se ligarão aos antígenos.
- Segue-se um passo de lavagem para remover o material não ligado.
- Em seguida, um segundo anticorpo é adicionado, que se liga ao primeiro anticorpo. O segundo anticorpo é acoplado a uma enzima ( por exemplo, peroxidase de rábano ), que torna o complexo visível através de uma reação de cor.
- Na etapa final, um substrato é adicionado, que a enzima converte em um corante . Quanto mais forte a cor, mais anticorpos há na amostra do paciente.
ELISA direto
O teste ELISA indireto oferece uma segunda possibilidade de detecção. Apenas um anticorpo é necessário para isso. Porque o anticorpo de detecção é acoplado diretamente à enzima.
Nesse caso, é possível medir o nível de antígeno de um paciente. É assim que funciona o teste de HIV, por exemplo. A vantagem do método é que ele é barato e funciona rapidamente. No entanto, não é tão sensível a isso e, portanto, é menos capaz de detectar pequenas quantidades de antígenos do que o teste indireto.
ELISA sanduíche
Outra técnica de ELISA é o chamado ELISA sanduíche. O nome vem do fato de que o antígeno é ligado por um anticorpo de cima e de baixo como em um sanduíche . O primeiro anticorpo é fixado no fundo da placa. Se o segundo anticorpo se ligou ao antígeno, ele é novamente detectado por um corante. Para este propósito, ele pode carregar uma enzima (diretamente) ou ser ligado por outro anticorpo que transporta a enzima (indiretamente).
O princípio sanduíche é muito sensível e é particularmente útil quando a amostra contém pouco antígeno. No entanto, o antígeno deve ser grande o suficiente para que dois anticorpos se liguem a ele ao mesmo tempo.
ELISA Competitivo
A última variante que consideramos é o teste ELISA competitivo. Como o nome sugere, diferentes antígenos competem pela ligação do anticorpo.
Aqui, também, o anticorpo está ligado ao fundo. Primeiro, ocorre a ligação entre o anticorpo e o antígeno da amostra. Quanto menos antígenos estiverem contidos, mais sítios de ligação de anticorpos livres existirão. Um segundo antígeno produzido artificialmente agora se liga a ele. Novamente detectamos o segundo antígeno por meio de uma reação de cor. Quanto menos antígeno havia na amostra, mais o segundo antígeno se ligava e mais forte era a coloração.
PCR
Além do teste ELISA, existem outros métodos para detectar infecções virais no organismo. Uma delas é a chamada reação em cadeia da polimerase (PCR). Assista nosso vídeo agora para ver como funciona!